ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സിന്തസിസിന്റെ തത്വങ്ങൾ

സോളിഡ് ഫേസ് സിയാലിക് അമൈഡ് ട്രൈഗ്ലിസറൈഡ് രീതി ഉപയോഗിച്ചാണ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സിന്തസിസ് നടത്തുന്നത്, അതിലൂടെ ഡിഎൻഎയുടെ 3′ അവസാനം ഒരു സോളിഡ് ഫേസ് സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റിൽ നിശ്ചലമാക്കുകയും ആവശ്യമുള്ള ഡിഎൻഎ ശകലം സമന്വയിപ്പിക്കുന്നതുവരെ 3′ മുതൽ 5′ വരെ ദിശയിൽ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ ചേർക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. .ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് പ്രയോഗം വഴി ഡിഎൻഎ സിന്തസിസിൽ നിന്ന് ഇത് വ്യത്യസ്തമാണ്.

ആദ്യ അടിത്തറയുടെ 3′ അവസാനം സിന്തസിസ് സമയത്ത് CPG-യിൽ നിശ്ചലമാക്കപ്പെടുന്നു, അടുത്ത ബേസിന്റെ 5′-OH ഡി-പി-ടോലിൽ ട്രൈറ്റിൽ ഡിഎംടി ഉപയോഗിച്ച് സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു, ബേസിലെ അമിനോ ഗ്രൂപ്പ് ബെൻസോയിക് ആസിഡും 3′ ഉപയോഗിച്ചും സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു. -OH ഒരു അമിനോ ഫോസ്ഫേറ്റ് സംയുക്തം ഉപയോഗിച്ച് സജീവമാക്കുന്നു.1 ബേസിന്റെ 5 5′-OH ന്റെ 1 അടിത്തറയും അടുത്ത ബേസിന്റെ 3′-OH-ഉം ഒരു ഫോസ്ഫൈറ്റ് ട്രൈഗ്ലിസറൈഡ് ഉണ്ടാക്കുന്നു, അത് അയോഡിനുമായി ഓക്സിഡൈസ് ചെയ്ത് ഫോസ്ഫേറ്റ് ട്രൈഗ്ലിസറൈഡായി മാറുന്നു, രണ്ടാമത്തെ ബേസ് 5′-OH-ലെ സംരക്ഷണം നീക്കം ചെയ്യുന്നു ഡിക്ലോറോഅസെറ്റിക് ആസിഡ് DM സൈക്കിളുകൾ അടുത്ത ബേസ് കൂട്ടിച്ചേർക്കലിലൂടെ ചേർക്കുന്നു, കൂടാതെ 5′-OH-ലെ സംരക്ഷകനെ ഒരു ദുർബലമായ ആസിഡ് ഉപയോഗിച്ച് നീക്കം ചെയ്യുന്നു. ചൂടാക്കുമ്പോൾ അമോണിയം ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് സാന്ദ്രീകൃതമാക്കുമ്പോൾ, അമോണിയം ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് നീക്കംചെയ്യുന്നു, ശകലം വാക്വം ഉണക്കി, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ലിക്വിഡ് ക്രോമാറ്റോഗ്രഫി അല്ലെങ്കിൽ PAGE വഴി ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെടുന്നു.

ഒലിഗോ സിന്തസിസിന്റെ ഘട്ടങ്ങൾ

തടയൽ

ദിTCA സൊല്യൂഷൻ ചേർത്ത് 5 end DMT പ്രൊട്ടക്റ്റിംഗ് ഗ്രൂപ്പ് നീക്കം ചെയ്യുന്നു.

സജീവമാക്കൽ

ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് മോണോമറുമായി ആക്റ്റിവേറ്ററിനെ കലർത്തി സജീവമായ ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് മോണോമർ ഇന്റർമീഡിയറ്റ് രൂപീകരിക്കുന്നു.

ഇണചേരൽ

5-ടെർമിനൽ ഹൈഡ്രോക്‌സിൽ ഗ്രൂപ്പ് ഒരു ആന്റി-ജനറേറ്റീവ് കണ്ടൻസേഷൻ പ്രതികരണത്തിൽ സജീവമായ ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് ഇന്റർമീഡിയറ്റുമായി പ്രതിപ്രവർത്തിച്ച് അസ്ഥിരമായ ഫോസ്ഫൈറ്റ് ട്രൈഗ്ലിസറൈഡ് ബോണ്ട് ഉണ്ടാക്കുന്നു.

ക്യാപ്പിംഗ് 

ഒരു ക്യാപ്പിംഗ് ഏജന്റ് കൂട്ടിച്ചേർക്കുന്നത് കണ്ടൻസേഷൻ പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിൽ ഉൾപ്പെടാത്ത അധിക ഹൈഡ്രോക്സൈൽ ഗ്രൂപ്പുകളുമായി ഒരു അസറ്റിലേഷൻ ക്യാപ്പിംഗ് പ്രതികരണം നടത്തുന്നു.

ഓക്സിഡേഷൻ 

വെള്ളം അടങ്ങിയ അയോഡിൻ ലായനി ചേർക്കുന്നത് അസ്ഥിരമായ ഫോസ്ഫൈറ്റ് ബോണ്ടുകളുമായി ഓക്സിഡേഷൻ വഴി പ്രതിപ്രവർത്തിച്ച് സ്ഥിരതയുള്ള ഫോസ്ഫോറിക് ആസിഡ് ട്രൈഗ്ലിസറൈഡ് ബോണ്ടുകൾ ഉണ്ടാക്കുന്നു.

സയനോഎഥിൽ പിളർപ്പ്

ഫോസ്ഫേറ്റ് ട്രൈഗ്ലിസറൈഡ് ബോണ്ടിൽ നിന്ന് സയനോഎഥൈൽ ഗ്രൂപ്പിനെ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി ഡിഇഎ ലായനി ചേർത്ത് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഉൽപ്പന്നം.

ക്ലീവഡ് & ഡിപ്രൊട്ടക്ഷൻ

സാന്ദ്രീകൃത അമോണിയം ഹൈഡ്രോക്സൈഡ് ലായനി ചേർത്ത് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ശകലങ്ങൾ സോളിഡ് ഫേസ് കാരിയറിൽ നിന്ന് പിളർന്ന് ബേസുകളുടെ ഹൈഡ്രജൻ ബോണ്ടുകളിൽ നിന്ന് സംരക്ഷിക്കുന്ന ഗ്രൂപ്പുകളെ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി ചൂടാക്കുന്നു.